Lielākā daļa šūnu komponentu ir bezkrāsaini, un tos nevar skaidri atšķirt zem mikroskopa. Pamata priekšnoteikumsfluorescences mikroskopijair sastāvdaļu krāsošana ar krāsvielām.
Fluorescējošās krāsvielas, kas pazīstamas arī kā fluoroforas vai fluorescējošās krāsvielas, ir molekulas, kas absorbē noteikta viļņa garuma (parasti UV) ierosmes gaismu un pēc īsas aiztures izstaro ilgāka viļņa garuma gaismu. Aizkavēšanās starp absorbciju un emisiju ir niecīga, parasti nanosekundēs.
Pēc tam izstaroto gaismu var filtrēt no ierosmes gaismas, lai atklātu fluorofora atrašanās vietu.
Fluorescences mikroskopija izmanto intensīvāku gaismu, lai apgaismotu paraugu. Šī gaisma ierosina paraugā esošo fluorescējošu materiālu, kas pēc tam izstaro gaismu ar garāku viļņa garumu.
Iegūtais attēls ir balstīts uz otra gaismas avota vai fluorescējošas vielas emisijas viļņa garumu, kas nav gaisma, kas sākotnēji tika izmantota parauga apgaismošanai un ierosināšanai.
apstrāde
Gaisma ierosmes viļņa garumā tiek fokusēta uz paraugu caur objektīva lēcu. Parauga izstarotā fluorescence tiek fokusēta uz detektoru caur objektīvu. Tā kā lielākā daļa ierosmes gaismas tiek pārraidīta caur paraugu, tikai atstarotā ierosmes gaisma sasniedz mērķi kopā ar izstaroto gaismu.
formā
"Fluorescences mikroskopija" attiecas uz jebkuru mikroskopu, kurā attēlu ģenerēšanai izmanto fluorescenci, neatkarīgi no tā, vai tā ir vienkāršāka ierīce, piemēram, epifluorescences mikroskops, vai sarežģītāks dizains, piemēram, konfokālais mikroskops, kas izmanto optisko griezumu, lai iegūtu labāku izšķirtspēju. Fluorescences attēls.
Lielākā daļa izmantoto fluorescences mikroskopu ir epifluorescences mikroskopi, kuros fluoroforu ierosināšana un fluorescences noteikšana tiek veikta caur to pašu optisko ceļu (ti, caur objektīvu).
